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蛋白酶k在dna提取中的作用

  • 發(fā)布時間:2024-06-04 16:47:45,加入時間:2024年05月07日(距今502天)
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中文名稱:蛋白酶K

中文同義詞:蛋白內(nèi)切酶K;內(nèi)肽酶 K;肽酶 K;

英文名稱: Proteinase K

CAS號:39450-01-6

分子式:C29H27N2O12P

分子量:626.504641

純度:電泳濃度99%

酶活:32u/mg

規(guī)格:1g/瓶

性狀;白色粉末

作用:生物檢測試劑,去除DNA酶和RNA酶

保存方法:避光低溫冷藏

蛋白酶K時常應(yīng)用于分子生物學(xué)領(lǐng)域。在制備核酸時,蛋白酶K可以將雜蛋白去除,并迅速使核酸酶失活,避免其降解目標(biāo)產(chǎn)物DNA和RNA。另外,蛋白酶K還有其他優(yōu)點,它在變性劑存在下仍能保有活性,如SDS、尿素、EDTA等等,這點與其他蛋白酶(如胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶)相當(dāng)不同。

蛋白酶K的應(yīng)用主要為核酸提取時去除DNA酶和RNA酶,并且可將結(jié)合于基因組上的組蛋白去除,還可用于堿性磷酸酶的失活。目前分子生物學(xué)技術(shù)已應(yīng)用于許多檢測標(biāo)準(zhǔn)中,例如轉(zhuǎn)基因檢測、動物屬性檢測、致病微生物檢測等。在分子生物學(xué)檢測中核酸的提取質(zhì)量直接影響了后續(xù)PCR反應(yīng)的擴增效率。許多標(biāo)準(zhǔn)在核酸提取步驟中都設(shè)立了添加蛋白酶K消化的步驟,以期提取較純的核酸。為了保護核酸,分子生物學(xué)核酸提取實驗中通常含有EDTA等試劑,由于EDTA可以與金屬離子絡(luò)合,因此可能會導(dǎo)致酶活性受到影響;并且通常為pH8.0時和55℃條件下進行消化,不同pH值和溫度條件會使得酶活性受到影響。

分離DNA和RNA期間使核苷酸酶蛋白失活。去除內(nèi)毒素對陽離子蛋白的約束,如溶菌酶和核糖核酸酶。研究報告顯示用于分離肝,酵母,綠豆線粒體測定細(xì)胞膜上的酶用于抗體標(biāo)記,石蠟包埋組織切片中暴露抗原結(jié)合位點。消化腦組織樣本中的蛋白質(zhì),用于朊病毒的傳染性海綿狀腦病(TSE)的研究。

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